魚elisa檢測試劑盒運用雙抗夾心ELISA法定量測定血清、血漿、組織勻漿、細胞裂解液、細胞培養(yǎng)上清液和其他生物液體中(Ig)含量。下面我們來看看它具體實驗前需要準備好哪些工作以及操作步驟？
實驗前的準備工作：
1、準備好所有實驗額外所需物品，如試管 吸頭 移液器 離心機等。
2、確定試劑盒在有效期內(nèi)。
3、仔細閱讀說明書。
4、按說明書確定所有試劑齊全（數(shù)量 體積）。
5、標本制備要規(guī)范，每份標本體積要按2-3個復孔以上的量制備（貯存），盡量分裝做備份。
6、根據(jù)檢測標本數(shù)量確定所需試劑的量。
7、按說明書將所用試劑盒平衡至室溫，配制所需試劑。
魚elisa檢測試劑盒的操作步驟：
1、使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2、根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
3、加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
4、甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
5、每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6、甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
7、每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
8、取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
9、在450nm波長處測定各孔的OD值。
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